實(shí)驗(yàn)室日常，從離心開(kāi)始
今天是食品檢驗(yàn)科的病毒檢測(cè)，下面介紹是的是軟質(zhì)水果和生食蔬菜的諾如病毒的提取。
軟質(zhì)水果和生食蔬菜的病毒提取步驟：
1、將25g軟質(zhì)水果或生食蔬菜切成約2.5cmX2.5cmX2.5cm的小塊（如水果或蔬菜小于該體積，可不切）。
2、將樣品小塊移至帶有400 mL網(wǎng)狀過(guò)濾袋的樣品袋，加入40 mLTGBE溶液（軟質(zhì)水果樣品，需加入30U A.niger果膠酶，或1140U A.aculeatus果膠酶），加入10μL過(guò)程控制病毒。
3、室溫，60次/min，振蕩20 min。酸性軟質(zhì)水果需在振蕩過(guò)程中,每隔10 min檢測(cè)pH，如pH低于9.0時(shí)，使用1 mol/L NaOH調(diào)pH至9.5,每調(diào)整一次pH，延長(zhǎng)振蕩時(shí)間10 min。
4、將振蕩液轉(zhuǎn)移至離心管，如體枳較大，可使用2根離心管。10000 r/min，4℃，離心30 min。取上清至干凈試管或三角瓶，用1 mol/L HCl調(diào)pH至7.0。
5、加入0.25倍體積 5XPEG/NaCl溶液，使終溶液濃度為100 g/L PEG，0.3 mol/L NaCl。60 s搖勻，4℃，60 次/min，振蕩60 min。10000 r/min，4℃，離心 30 min，棄上清。高速冷凍離心機(jī)10000 r/min，4℃，離心5 min，緊實(shí)沉淀，棄上清。
6、500 μL PBS懸浮沉淀。如食品樣品為生食蔬菜，可直接將懸浮液轉(zhuǎn)移至干凈試管，測(cè)定并記錄懸浮液毫升數(shù)，用于后續(xù)RNA提取。
如食品樣品為軟質(zhì)水果，將懸浮液轉(zhuǎn)移至耐氯仿試管中。加入500 μL氯仿/丁醇混合液，渦旋混勻，室溫靜置5 min。高速冷凍離心機(jī)10000 r/min，4℃，離心 15 min，將液相部分仔細(xì)轉(zhuǎn)移至干凈試管，測(cè)定并記錄懸浮液毫升數(shù)，用于后續(xù)RNA提取。
按照常規(guī)的提取軟質(zhì)水果和生食蔬菜的病毒，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程需要，至少使用離心機(jī) 3 次以上……