凝膠遷移或電泳遷移（EMSA）原理
凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物或RNA-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的DNA結合蛋白，可用純化蛋白，部分純化蛋白，或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時，依據目的RNA結合蛋白的位置，可用純化或部分純化的蛋白，也可用核或胞質細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特異），和其它非相關的片段（非特異），來確定DNA或RNA結合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下，依據復合物的特點和強度來確定特異結合。

主要儀器

高速組織搗碎機： SWISS KINEMATIC Ltd. Co（型號：PT1600E）

電泳儀：北京六一儀器廠（型號：DYY-8C）

電泳槽：北京六一儀器廠（型號：DYCZ-24D）

轉印槽：北京六一儀器廠（型號：DYCZ-40D）

低溫高速離心機：湖南湘儀公司（型號：H2050R）

超低溫冰箱：美國FORMA公司（型號：702）

分光光度計：上海分析儀器總廠（型號：721）

脫色搖床：上海琪特分析儀器有限公司（型號：STS-2）

主要試劑

蛋白質預染分子量marker(118,90,48,36,27,20kd)：Fermentas

NC膜：Millipore公司（型號：0.45um）

化學發光底物：PIERCE公司

電泳類生化試劑均為美國amresco公司產品

其他生化試劑為國藥集團上海化學試劑公司產品

總蛋白測定試劑盒：南京建成生物工程研究所

NF-KB探針：由Invitrogen公司合成與標記

成像系統：富士FLA-5000全功能激光影像成像系統

EMSA實驗步驟

1.探針的標記

2.探針的純化

3.EMSA 膠的配制

4.EMSA結合反應

5.電泳分析

客戶需知

方法：    

同位素Ｐ３２標記探針/生物素/熒光素標記/進行檢測。

技術要點：　

實驗過程包括核蛋白的提取，同位素標記/生物素/熒光素標記/與純化，凝膠電泳，膠片暴光等。在ＥＭＳＡ操作中會用到同位素，要注意實驗室環境和實驗員的保護。

客戶提供：

細胞　２５ＭＬ的細胞瓶培養的細胞。

組織　２００mg－４００mg

探針　自備探針。

收費標準

歡迎詢價詳談

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