人腎皮質近曲小管上皮細胞 Human renal cortical proximal tubule epithelial cells 詳細說明
步驟如下:
1)棄去培養液,用PBS洗1-2次。
2)向瓶內加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培養液,輕輕吹打細胞。
3)加入等量的的培養液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養
4)傳代比例:1:2-1:3
(6)常見問題及解決方案
1)培養瓶有破裂,培養液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。
2)細胞漂浮:培養瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留10ml培養液培養觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。
傳代方法:收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態:如果沒長滿,將培養瓶用75%酒精xd后在超凈臺內更換新鮮培養液,繼續培養,如果細胞已經長滿(約80%-90%)則傳代后繼續培養。
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技術相關問答:
1. 如何選用特殊細胞系培養基?
培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,{sx}MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。
2. 何時須更換培養基?
視細胞生長密度而定, 或遵照細胞株基本數據上之更換時間,按時更換培養基即可。
3. 可否使用與原先培養條件不同之培養基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基, 若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基, 細胞大都無法立即適應, 造成細胞無法存活。
4.可否使用與原先培養條件不同之血清種類?
不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
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基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質及糖被構成的生物膜,即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質合成的機器—核糖體,毫無例外地存在于一切細胞內,核糖體,是蛋白質合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性,包括細胞自身的運動和細胞內部的物質運動
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