一、TYH聚合物反相色譜填料
TYH-SF微球合成技術(shù)可規(guī)模化制備聚苯乙烯/二乙烯基苯和聚甲基丙烯酸酯為基質(zhì)的兩種性能互補(bǔ)的高性能聚合物反相色譜填料,這些填料具有剛性強(qiáng)、粒徑均一、低反壓、耐酸堿等特點(diǎn)。TYH聚合物反相色譜填料具有不同的粒徑規(guī)格(3μm、5μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、40μm和50μm)和優(yōu)化的孔徑結(jié)構(gòu)(100?、300?、500?和800?四種孔徑)以及無孔結(jié)構(gòu),可以滿足從實(shí)驗(yàn)室分析到大規(guī)模工業(yè)分離的各種需求,如tr產(chǎn)物、kss、有機(jī)化合物、多肽、蛋白質(zhì)和寡核苷酸等yw分子的{gx}分離。
二、TYH聚合物反相色譜填料的特點(diǎn)
· 球形,粒徑高度均一
· 化學(xué)穩(wěn)定性高和寬pH值范圍(pH=1-14)
· 優(yōu)化的孔徑結(jié)構(gòu)
· 高比表面積和高載量
· 機(jī)械強(qiáng)度高
· 低反壓、柱效高
· 不同極性基質(zhì)的選擇
三、粒徑高度均一
控制微球的粒徑和均一性對(duì)色譜應(yīng)用至關(guān)重要,因?yàn)槲⑶虻牧胶土椒植纪ǔ?梢詻Q定柱效。在色譜分離中,溶質(zhì)的縱向擴(kuò)散是色譜帶和色譜峰拓寬的主要原因。對(duì)于特定大小的微球,采用均一微球裝填的色譜柱可以有效地縮窄色譜帶和色譜峰,還可以獲得{zd1}的反壓,從而使這些色譜柱呈高柱效和高分辯率。
可以提供從3μm到50μm范圍內(nèi)任意大小、粒徑均一的聚合物反相色譜填料,客戶可以任意選擇,能夠根據(jù)客戶的需求定制。圖1顯示了 TYH系列聚合物反相色譜填料不同粒徑大小的掃描電鏡圖。
采用Beckman Coulter Counter測量TYH聚合物色譜填料的粒徑分布圖,如圖2所示,填料的變異系數(shù)即CV<3%。結(jié)果表明TYH聚合物色譜填料具有高度的均一性。
圖1. TYH聚合物反相色譜填料不同粒徑大小的掃描電鏡圖
圖2. TYH聚合物反相色譜填料的粒徑分布圖
四、優(yōu)化的孔結(jié)構(gòu)
微球的孔徑大小與色譜填料的比表面積有很大的關(guān)系,孔徑越小則比表面積越大。目標(biāo)分離物質(zhì)為小分子,通常選擇孔徑小的色譜填料;目標(biāo)分離物質(zhì)為生物大分子,則選擇孔徑較大的色譜填料。對(duì)于特定的目標(biāo)分離物質(zhì),選擇優(yōu)化的孔徑結(jié)構(gòu)色譜填料不僅可以增加上樣量,而且還可以提高分離純度。
可以提供不同孔徑大小的色譜填料,包括100?、300?、500?和800?四種孔徑。圖3為四種不同孔徑大小的均一聚合物反相色譜填料的掃描電鏡圖。
圖3. 四種不同孔徑大小的均一TYH聚合物反相色譜填料的掃描電鏡圖
五、批次間的穩(wěn)定性
能確保色譜填料的批次穩(wěn)定性。我們對(duì)每批次產(chǎn)品的性能(如粒徑大小和粒徑分布等)都進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。圖4顯示了不同批次的填料產(chǎn)品性能,說明了我們規(guī)模化生產(chǎn)的填料具有良好的穩(wěn)定性。圖5顯示了18批次的填料應(yīng)用于蛋白的分離純化,色譜圖進(jìn)一步說明了TYH色譜填料批次間的穩(wěn)定性。
圖4:不同批次的填料產(chǎn)品的粒徑大小和粒徑分布的穩(wěn)定性
圖5. 色譜填料分離蛋白18批次的重現(xiàn)性
六、化學(xué)穩(wěn)定性高
TYH-SF系列聚合物反相色譜填料是由高交聯(lián)的聚苯乙烯/二乙烯基苯或者是高交聯(lián)的聚甲基丙烯酸酯組成,其在全pH值范圍(pH 1-14)內(nèi)具有良好的溫度性。在極端的酸性溶液(如1M HCl)或極端的堿性溶液(如1M NaOH)和有機(jī)溶劑(包括乙醇、甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、DMSO、四氫呋喃等)中都可以保持微球的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和性能的穩(wěn)定性。
七、不同極性色譜填料的選擇
TYH系列聚合物反相色譜填料是由高交聯(lián)的聚苯乙烯/二乙烯基苯或者是高交聯(lián)的聚甲基丙烯酸酯組成。通過調(diào)節(jié)不同基質(zhì)的比例,可以提供不同極性的聚合物反相色譜填料,包括TYH- SF,TYH-SFW和TYH- SFS三種不同極性的填料,填料的極性逐步增強(qiáng)。
八、反壓低、高柱效
TYH系列聚合物反相色譜填料的粒徑高度均一、剛性強(qiáng),因此,填裝后的色譜柱的柱床穩(wěn)定,反壓低。TYH10SF-300色譜填料的塔板數(shù)可以達(dá)到50000 N/m。
九、色譜填料的多種選擇
純化工藝基本分為粗提、中間純化和精細(xì)純化等三個(gè)分離步驟。TYH系列聚合物反相色譜填料可以提供從樣品的粗提、中間純化和精細(xì)純化整個(gè)分離過程的選擇。
粗提:是指從樣品中捕獲目標(biāo)成分,初步分離目標(biāo)物,屬于低分辨率的分離純化,純度一般能達(dá)到70~90%。可選擇100微米的TYH系列色譜填料。
中間純化:是指從捕獲到的目標(biāo)物中除去大部分雜質(zhì),屬于中高等分辨率的分離純化,純度能達(dá)到90~98%。可選擇30微米或40微米的TYH 系列色譜填料。
精細(xì)純化:是指目標(biāo)物達(dá)到預(yù)期的純度,除去與目標(biāo)物結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì),屬于高分辨率的分離純化,純度能達(dá)到98~99%以上。可選擇10微米的TYH 系列色譜填料。
▲ TYH聚合物反相填料分離純化案例
※ 胰島素的分離純化
有一整套完整的胰島素分離純化工藝,成功的將胰島素粗品從45%一步純化到99%。
制備條件:
儀器:高壓設(shè)備 上樣量:100mg/ml 檢測:214nm
TYH-40SF-300填料技術(shù)參數(shù)
檢測項(xiàng)目
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技術(shù)指標(biāo)
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填料基質(zhì)
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SF/DVB微球
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微球粒徑 (μm)
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40 ± 2
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CV值
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< 3%
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交聯(lián)度
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80%
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孔徑 (?)
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300
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pH值范圍
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1-14
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外觀、色澤
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球形,白色或淡黃色
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干粉堆積密度(g/ml)
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0.25-0.30
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比表面積(m2/g)
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800
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孔容(ml/g)
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1.5
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胰島素動(dòng)態(tài)載量(mg/ml)
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50
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金屬離子含量
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<10 ppm
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{zd0}壓力
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100 bar
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化學(xué)穩(wěn)定性
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幾乎適用于所有溶劑(包括:純水、異丙醇、乙醇、乙腈、1M HCl、1M NaOH;甲醇等。
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填料的清洗和再生
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聚合物反相填料可以在線清洗或轉(zhuǎn)移到容器中處理。可用非極性逐漸增強(qiáng)的溶劑清洗色譜填料,也可以采用堿洗。建議0.1-0.5M NaOH 60%甲醇溶液沖洗,再用0.1-0.5M HCl 60%甲醇溶液沖洗,然后用流動(dòng)相平衡。
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儲(chǔ)存
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20%乙醇
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保存條件
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室溫
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十、TYH聚合物反相色譜填料系列產(chǎn)品
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序號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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粒徑(μm)
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孔徑(?)
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介質(zhì)組成
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1
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TYH-SF3
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3
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無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
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2
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TYH-SF5
|
5
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
3
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TYH-SF10
|
10
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
4
|
TYH-SF15
|
15
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
5
|
TYH-SF20
|
20
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
6
|
TYH-SF25
|
25
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
7
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TYH-SF30
|
30
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
8
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TYH-SF40
|
40
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
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9
|
TYH-SF50
|
50
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
10
|
TYH-SF60
|
60
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
11
|
TYH-SF100
|
100
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
|
12
|
TYH-SF200
|
200
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
PS/DVB
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13
|
TYH-SFW10
|
10
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
14
|
TYH-SFW15
|
15
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
15
|
TYH-SFW20
|
20
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
16
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TYH-SFW30
|
30
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
17
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TYH-SFW40
|
40
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
18
|
TYH-SFW50
|
50
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
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19
|
TYH-SFW60
|
60
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
20
|
TYH-SFW100
|
100
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
21
|
TYH-SFW200
|
200
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Poly DVB/acrylate
|
22
|
TYH-SFS10
|
10
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
|
23
|
TYH-SFS15
|
15
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
|
24
|
TYH-SFS20
|
20
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
|
25
|
TYH-SFS30
|
30
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
|
26
|
TYH-SFS40
|
40
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
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27
|
TYH-SFS50
|
50
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
|
28
|
TYH-SFS60
|
60
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
|
29
|
TYH-SFS100
|
100
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
|
30
|
TYH-SFS200
|
200
|
無孔, 100, 300, 500, 800
|
Polyacrylate
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