硅膠CCM的表面特征

　　在水溶液中，硅膠表面上的硅羥基對生物大分子的吸附性極強，通常認(rèn)為是不可逆的.硅膠表面的硅羥基會與膜蛋白和脂類分子中的極性基團作用，使細(xì)胞膜牢固地吸附(固定)在硅膠的表面.另外，細(xì)胞膜具有磷脂雙層結(jié)構(gòu)的特性,脂質(zhì)分子極性頭間的離子相互作用,膜內(nèi)部烷基鏈間的疏水相互作用,使吸附在硅膠表面的細(xì)胞膜碎片間彼此靠近而融合,并自動形成閉合結(jié)構(gòu),結(jié)果硅膠表面wq被細(xì)胞膜覆蓋.而通常用的化學(xué)鍵合方法則由于空間效應(yīng),根本無法實現(xiàn)對硅膠表面硅羥基的wq覆蓋.  

　　為證實上述觀點，用電子顯微鏡技術(shù)和表面能譜技術(shù)對硅膠CCM表面進(jìn)行了測試.圖1為用電子顯微鏡放大6000倍后觀察到的硅膠載體和硅膠CCM電子顯微鏡圖像.可見,硅膠CCM中細(xì)胞膜已wq覆蓋在硅膠表面并與硅膠連為一體,與純硅膠載體明顯不同，可以看出，載體硅膠表面被細(xì)胞膜有效地覆蓋后,由于單一硅膠CCM顆粒表面細(xì)胞膜間的相互作用使多個硅膠CCM呈堆積狀.在0.52kV處有氧(O)的能譜峰，1.74kV處有較強的硅(Si)能譜峰；在0.27kV處增加了碳(C)的能譜峰，0.52kV處氧(O)的能譜峰強度有所增加，而1.74kV處的硅(Si)峰幾乎消失.在2.05kV處的鉑(Pt)峰為生物樣品制片時噴涂的鉑金.這進(jìn)一步證實了硅膠CCM中硅膠表面的硅羥基已wq被細(xì)胞膜所覆蓋.

　　硅膠CCM的色譜特性

　　RBA方法中使用的受體制劑，多數(shù)為含yw受體的懸液細(xì)胞膜，在一定的條件下，直接與標(biāo)記yw(或化合物)進(jìn)行靜態(tài)結(jié)合反應(yīng).最終,由標(biāo)記物的結(jié)合量間接推算yw與膜受體的相互作用.硅膠CCM具備細(xì)胞膜制劑和色譜填料的雙重特性，由此形成的色譜系統(tǒng)，可直接研究yw與固定相上膜受體的動態(tài)相互作用.所得色譜參數(shù)容量因子k′，分離因子α和分辨率R等將直接表征yw在膜受體上的作用強度和立體選擇性,并與yw最終的藥理作用密切相關(guān).

　　(1)鈣拮抗劑在硅膠載體與硅膠CCM固定相上色譜保留特性比較.若僅以硅膠載體為固定相，磷酸鹽緩沖溶液為流動相，則構(gòu)成了正相硅膠/反相洗脫的色譜系統(tǒng).作者曾對此系統(tǒng)的保留機理進(jìn)行過研究，其溶質(zhì)的保留行為在理論上應(yīng)與硅膠CCM為固定相的色譜系統(tǒng)有本質(zhì)的區(qū)別.為此測定了6種鈣拮抗劑分別在硅膠載體固定相、兔紅細(xì)胞膜固定相和心肌細(xì)胞膜固定相上的容量因子。在硅膠載體為固定相的色譜系統(tǒng)中，鈣拮抗劑的保留時間都很短，柱壓也很低(＜1MPa).而在兔紅細(xì)胞膜和心肌細(xì)胞膜為固定相的色譜系統(tǒng)中其保留明顯增長，柱壓也較高(＞6MPa)，這進(jìn)一步證實了在硅膠CCM固定相表面細(xì)胞膜對鈣拮抗劑的保留起著支配作用.

　　(2)二氫吡啶類鈣拮抗劑在硅膠CCM固定相上的立體選擇性.yw和膜受體分子的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)，對yw與受體的相互作用起重要作用，受體對yw的識別、親合力和yw呈現(xiàn)內(nèi)在活性，是在三維空間中實現(xiàn)的，受空間因素的影響.二氫吡啶類鈣拮抗劑在兔小腦CCM色譜系統(tǒng)中,表現(xiàn)出明顯的但又各不相同的立體選擇性.如尼卡地平各異構(gòu)體在兔小腦細(xì)胞膜固定相上得到wq分離，尼群地平、尼瓜地平和Bay-K8644得到部分分離,而尼莫地平則沒被分離.可見，由兔小腦細(xì)胞膜固定相形成的色譜系統(tǒng),在給定色譜條件下，對部分二氫吡啶類yw異構(gòu)體具有較強的識別能力.而且,不同yw異構(gòu)體的立體選擇性不同.  

　　由于硅膠CCM的酶活性隨時間的增長而降低，在目前條件下，柱壽命一般在1周之內(nèi)，與通常的色譜柱比較壽命短.柱的重現(xiàn)性以維拉帕米為例，測定其在兔心肌細(xì)胞膜固定相的容量因子，結(jié)果日內(nèi)平均值為35.0±1.8(n=5)，日間平均值為31.4±3.7(n=5)，柱間平均值為36.7±3.1(n=4)，結(jié)果較為滿意.

　　3種細(xì)胞膜酶活性隨溫度和時間的變化規(guī)律

　　取兔紅細(xì)胞膜懸液，等體積分為3份，分別用作懸液細(xì)胞膜、離心分離后取沉淀用作沉淀細(xì)胞膜和制成硅膠CCM，同時將這3種細(xì)胞膜貯存在-28℃，-10℃，4℃及25℃的條件下，分別在放置0，12，36，60，80和108h后取出,測定3種細(xì)胞膜的K＋，Na＋-ATP酶活性，計算其穩(wěn)定性。

中山硅膠安全性能

　　硅膠主要成分是二氧化硅，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不燃燒。硅膠是一種非晶態(tài)二氧化硅，應(yīng)控制車間粉塵含量不大于10mg/m3，需加強排風(fēng)，操作時戴口罩。
　　硅膠有很強的吸附能力，對人的皮膚能產(chǎn)生干燥作用，因此，操作時應(yīng)穿戴好工作服。若硅膠進(jìn)入眼中，需用大量的水沖洗，并盡快找醫(yī)生zl。
　　藍(lán)色硅膠由于含有少量的氯化鈷，有毒，應(yīng)避免和食品接觸和吸入口中，如發(fā)生中毒事件應(yīng)立即找醫(yī)生zl。