1 范圍
本規(guī)范規(guī)定了動(dòng)物皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的基本原則、要求和方法。
本規(guī)范適用于化妝品原料及其產(chǎn)品安全性毒理學(xué)檢測(cè)。
2 規(guī)范性引用文件
OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No 406，July 1992）
USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines（Series 870.2600，Aug.1998）
3 試驗(yàn)?zāi)康?br /> 確定重復(fù)接觸化妝品及其原料對(duì)哺乳動(dòng)物是否可引起變態(tài)反應(yīng)及其程度。
4 定義
4.1 皮膚變態(tài)反應(yīng)（過(guò)敏性接觸性皮炎）（Skin sensitization，allergic contact dermatitis）
是皮膚對(duì)一種物質(zhì)產(chǎn)生的免疫源性皮膚反應(yīng)。在人類這種反應(yīng)可能以瘙癢、紅斑、qz、
水皰、融合水皰為特征。動(dòng)物的反應(yīng)不同，可能只見(jiàn)到皮膚紅斑和水腫。
4.2 誘導(dǎo)接觸（Induction exposure）
指機(jī)體通過(guò)接觸受試物而誘導(dǎo)出過(guò)敏狀態(tài)的試驗(yàn)性暴露。
4.3 誘導(dǎo)階段（Induction period）
指機(jī)體通過(guò)接觸受試物而誘導(dǎo)出過(guò)敏狀態(tài)所需的時(shí)間，一般至少一周。
4.4 激發(fā)接觸（Challenge exposure）
機(jī)體接受誘導(dǎo)暴露后，再次接觸受試物的試驗(yàn)性暴露，以確定皮膚是否會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。
5 試驗(yàn)的基本原則
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通過(guò)多次皮膚涂抹（誘導(dǎo)接觸）或皮內(nèi)注射受試物 10d~14d（誘導(dǎo)階段）后，
給予激發(fā)劑量的受試物，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并與對(duì)照動(dòng)物比較對(duì)激發(fā)接觸受試物的皮膚反應(yīng)強(qiáng)
度。
5.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境
一般選用健康、成年雄性或雌性豚鼠，雌性動(dòng)物應(yīng)選用未孕或未曾產(chǎn)仔的。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房應(yīng)符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制，需注意補(bǔ)充
適量Vc。
5.2 動(dòng)物試驗(yàn)前準(zhǔn)備
試驗(yàn)前動(dòng)物要在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境中至少適應(yīng)3d~5d 時(shí)間。將動(dòng)物隨機(jī)分為受試物組和對(duì)
照組，按所選用的試驗(yàn)方法，選擇適當(dāng)部位給動(dòng)物備皮（去毛），避免損傷皮膚。試驗(yàn)開(kāi)始
和結(jié)束時(shí)應(yīng)記錄動(dòng)物體重。
5.3 無(wú)論在誘導(dǎo)階段或激發(fā)階段均應(yīng)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行全面觀察包括全身反應(yīng)和局部反應(yīng)，并作
完整記錄。
5.4 試驗(yàn)方法可靠性的檢查
使用已知的能引起輕度/中度致敏的陽(yáng)性物每隔半年檢查一次。局部封閉涂皮法至少有
30%動(dòng)物出現(xiàn)皮膚過(guò)敏反應(yīng)；皮內(nèi)注射法至少有60%動(dòng)物出現(xiàn)皮膚過(guò)敏反應(yīng)。陽(yáng)性物一般采
111
用2,4-二硝基氯代苯，肉桂醛，2-巰基苯并噻唑或?qū)Π被剿嵋阴ァ?br /> 6 試驗(yàn)方法
6.1 局部封閉涂皮試驗(yàn)（Buehler Test，BT）
6.1.1 動(dòng)物數(shù)
試驗(yàn)組至少20 只，對(duì)照組至少10 只。
6.1.2 劑量水平
誘導(dǎo)接觸受試物濃度為能引起皮膚輕度刺激反應(yīng)的{zg}濃度，激發(fā)接觸受試物濃度為不
能引起皮膚刺激反應(yīng)的{zg}濃度。試驗(yàn)濃度水平可以通過(guò)少量動(dòng)物（2~3 只）的預(yù)試驗(yàn)獲得。
水溶性受試物可用水或用無(wú)刺激性表面活性劑作為賦形劑，其它受試物可用80%乙醇
（誘導(dǎo)接觸）或丙酮（激發(fā)接觸）作賦形劑。
6.1.3 試驗(yàn)步驟
6.1.3.1 試驗(yàn)前約24h，將豚鼠背部左側(cè)去毛，去毛范圍為4cm2~6cm2。
6.1.3.2 誘導(dǎo)接觸：將受試物約0.2mL（g）涂在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物去毛區(qū)皮膚上，以二層紗布和一
層玻璃紙覆蓋，再以無(wú)刺激膠布封閉固定6h。第7d 和第14d 以同樣方法重復(fù)一次。
6.1.3.3 激發(fā)接觸：末次誘導(dǎo)后14d~28d，將約0.2mL 的受試物涂于豚鼠背部右側(cè)2cm×2cm
去毛區(qū)（接觸前24h 脫毛），然后用二層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再以無(wú)刺激膠布固定6h。
6.1.3.4 激發(fā)接觸后24h 和48h 觀察皮膚反應(yīng)，按表1 評(píng)分。
6.1.3.5 試驗(yàn)中需設(shè)陰性對(duì)照組，使用6.1.3.2 和6.1.3.3 的方法，在誘導(dǎo)接觸時(shí)僅涂以溶劑
作為對(duì)照，在激發(fā)接觸時(shí)涂以受試物。對(duì)照組動(dòng)物必須和受試物組動(dòng)物為同一批。在