沖洗：  材料自固定液中取出后，需立即沖洗，使其中所有的固定液全部除去，以妨礙染色 有些固定液，如10%福爾馬林液、Bouin氏液固定的材料，若時間較短的話可不必沖洗。但時間過長亦需沖洗  3、脫水（37度恒溫箱）  所謂脫水就是利用脫水劑將組織內的水分置換出來，以利于有機溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。  脫水是否徹底，直接關系到組織是否能充分透明   脫水過度（原因是組織在純酒精內時間過久，發生組織質地發生變化）容易造成組織發脆。造成組織發脆的原因還有加溫（溫度超過36℃）、脫水劑內加有丙酮、浸蠟用的石蠟

中二甲苯過多等等。一般我們總認為組織發脆跟高濃度酒精有關，而忽視了與低濃度的酒精關系，其實低濃度的酒精具有強大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內部使之脫水，組織如果在低濃度酒精里充分脫水，在高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，因此，僅需短時間就可完成，如果這時不縮短純酒精的時間，便會引起組織發脆；如果脫水時加溫，使用丙酮，還可引起組織收縮，并影響免疫組織化學的標記.

空腔器官：食管、胃、腸等應先行剖開，黏膜面向上平鋪于軟木板上，并用大頭針將標本邊緣釘于木板上，再放入固定液中，黏膜面覆蓋脫脂棉或紗布，或黏膜面向下浸與固定液中。

腦：整體腦組織固定時，鬧底向上，先將一長縫合線穿過腦基底動脈環，然后雙手捧著腦組織放入已注入固定液的容器中，再將縫合線兩頭輕輕向上提起，借助于水的浮力使腦組織懸浮于固定液中，然后將縫合線固定于容器壁上。腦組織固定所需時間較長，一般為10-15天，固定1周時應更換一次固定液。

眼球：眼球表面結構致密，固定液不宜滲入，固定時應先經角膜直徑做一個矢狀切口，切開角膜，將小紙片卷成一定厚度插入該切口，使固定液由此切口進入眼球內，以利固定。

非整體器官的小組織直接用足量固定液固定即可。

下面從原理方面簡要介紹幾種常用的組織化學染色技術：

1、顯示琥珀酸脫氫酶（SDH）活性的硝基-BT法：

（Succinate dehydrogenase）

⑴酶的定位及生物學意義：

琥珀酸脫氫酶是線粒體標志酶，其存在于所有有氧呼吸的細胞，和線粒體內膜緊密結合。該酶不需輔酶而自身有黃素蛋白（FP,Flavoprotein）為輔基。在組化反應中常用來反映三羧酸循環的情況。

⑵原理：上述的反應{zh1}一步的原理是，硝基-BT（Nitro-blue tetrozolyum，四唑氮藍）系異環族化合物四唑鹽，當它接受氫時，本身被還原為有色沉淀產物（甲）（Formazan）。